Anti-PCNA抗體（鼠單抗）

Anti-PCNA Antibody（Monoclonal Antibody from Mouse）

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系統(tǒng)性紅斑狼瘡）患者的血清中首次發(fā)現(xiàn)并命名，因其只存在于正常增殖細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞內(nèi)而得名，以后的研究發(fā)現(xiàn)PCNA與細(xì)胞DNA合成關(guān)系密切，在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用，是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的良好指標(biāo)。PCNA是一種分子量為36 kD的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞核內(nèi)合成，并存在于細(xì)胞核內(nèi)，為DNA聚合酶δ的輔助蛋白，該蛋白對(duì)聚合酶的持續(xù)合成能力起重要作用。在細(xì)胞核內(nèi)存在可溶性與不溶性兩種PCNA，可溶性PCNA在細(xì)胞周期各期中均有表達(dá)，其量在DNA合成過(guò)程中不發(fā)生明顯變化，易被去污劑提取、甲醇破壞；不溶性PCNA較穩(wěn)定，不易被去污劑洗脫、甲醇破壞，這種PCNA在G0～G1期細(xì)胞中無(wú)明顯表達(dá)，G1晚期，其表達(dá)大幅度增加，S期達(dá)到高峰，G2～M期明顯下降，其量的變化與DNA合成一致，檢測(cè)其在細(xì)胞中的表達(dá)，可作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。

注：WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence

本抗體如果用于常規(guī)的Western檢測(cè)，至少可以檢測(cè)50次。

● 貯存形式：

穩(wěn)定溶液，1 mg/ml抗體溶于PBS，50%甘油，pH7.2。

● 保存及運(yùn)輸條件：

-20℃保存，一年有效；避免反復(fù)凍融；濕冰運(yùn)輸。

● 使用說(shuō)明：

1. Western Blot雜交(ECL顯色)：1:2000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過(guò)夜。

2. 免疫熒光（IF）和免疫組化（IHC）：1:200-1000稀釋。

● 實(shí)驗(yàn)示例：

                    1           2         3         4           5

lane 1，5：ECL Marker；lane 2：總蛋白TP；lane 3：細(xì)胞漿蛋白，C-Pr；lane 4：細(xì)胞核蛋白，N-Pr

 Jurkat蛋白提?。嚎偟坝?a href="http://m.whshxx.cn/product/RL1020.html" target="_blank">RIPA（貨號(hào)：RL1020 ）提取。胞漿蛋白和核蛋白用動(dòng)物細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒（貨號(hào)：RTD8301）提取。

 制膠和電泳：RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒（貨號(hào)：RTD6132-15）；200 V 55 min

 轉(zhuǎn)膜：NC膜，1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液 400 mA 37 min

 封閉：Western無(wú)蛋白快速封閉液（貨號(hào)：PF1070） RT封閉 20 min

 一抗： Anti-PCNA抗體（鼠單抗）（貨號(hào)：APM5012） 1：5000

 二抗：HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG（貨號(hào)：HGM1060）1：5000

 ECL發(fā)光：RealECL發(fā)光液（貨號(hào)：EC2520）；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（貨號(hào)：RT523）拍照。