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非變性蛋白電泳Marker轉(zhuǎn)膜問題

http://m.whshxx.cn/news_detail.aspx?NewsID=248

寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（21-880 kD）

Broad MW Native Electrophoresis Protein Marker（21-880 kD）

●產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：

RTD6144   20次 100 μl

●儲(chǔ)存及運(yùn)輸條件：

-20℃保存，濕冰運(yùn)輸，有效期為12個(gè)月。

● 產(chǎn)品簡介：

    本產(chǎn)品有5種蛋白組成，分子量范圍為21-880 kD，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到5條主帶。

● 使用說明：

1. 取出產(chǎn)品后，常溫融化后，徹底混勻，上樣電泳。

注：上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請適當(dāng)調(diào)整上樣量。

2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號(hào)：RTD6130）或者蛋白預(yù)制膠（貨號(hào)RTD6118）。如自備試劑，經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進(jìn)行非變性電泳。

3. 電泳條件：

建議使用10%非變性膠或者4-20%梯度非變性膠（貨號(hào)：RTD6118-0420）進(jìn)行電泳。

4. 電泳結(jié)束后，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察結(jié)果。

注：使用銀染染色時(shí)，由于靈敏度高于考馬斯亮藍(lán)染色方法，需要適當(dāng)降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。

注意：

1. 本蛋白Marker不適用于變性蛋白電泳（SDS-PAGE），因?yàn)樵?/span>SDS存在下，含有多個(gè)亞單位的蛋白會(huì)不同程度解聚。

2. 在非變性條件下，蛋白的遷移與蛋白的電荷、蛋白形狀以及蛋白分子量都有關(guān)。因此，在一種凝膠濃度下使用本Marker不能精確估計(jì)出目的蛋白的分子量。非變性電泳中，蛋白分子量的確定應(yīng)該是在不同凝膠濃度下，確定出蛋白的Rf值，繪制出凝膠濃度對Rf的曲線從而判定蛋白的分子量。

● 實(shí)驗(yàn)示例：

1 4-20% Tris-甘氨酸 非變性膠電泳：

    4-20% RealPAGE Precast Gel
1×TG 200V 50-19mA  47min

2. 4-16% Blue Native：

3： 4-15% Tris-甘氨酸非變性：

使用RTD6144寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker （21-880）kD產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2023 IF11.7] A nanoparticle-based wireless deep brain stimulation system that reverses Parkinson’s disease.

Author: Junguang Wu, Xuejing Cui, Lin Bao, Guanyu Liu, Xiaoyu Wang, Chunying Chen

Journal: Sci. Adv. 11, eado4927 (2025)  15 January 2025

Institution: National  center for nanoscience and technology of  china

Paper link：https://www.science.org/doi/10.1126/sciadv.ado4927